(一)根据物质溶解度差别进行分离
1.结晶及重结晶法
利用不同温度可引起物质溶解度改变的性质来分离物质。选择结晶溶剂的原则是：对要结晶的成分热时溶解度大，冷时溶解度小，对杂质冷热都不溶或冷热都易溶。另外要求结晶溶剂不与待结晶物质发生化学反应;沸点较低、易挥发;无毒或毒性很小。
判断结晶纯度的方法。
(1)晶型均一，色泽均匀。
(2)有一定的熔点和较小的熔距，熔距应在2度以内。
(3)TLC或PC分别用三种以上溶剂系统检识，同单一圆整斑点。
(4)HPLC或GC检查呈现单峰。
2.沉淀法
(1)在溶液中加入另一种溶剂以改变混合的极性，使一部分物质沉淀析出。如：水提醇沉法(除去多糖或蛋白质);醇提水沉法(除去树脂或叶绿素);醇提乙醚沉淀或丙酮沉淀法(使皂苷沉淀析出)
(2)pH法：对酸性、碱性或两性有机化合物来说，常可通过加入酸、碱以调节溶液的pH值，改变分子的存在状态(游离型或解离型)，从而改变溶解度而实现分离。
酸提碱沉法(使生物碱类成分沉淀)。碱提酸沉法(使黄酮、等沉淀);等电点法(使蛋白质沉淀)
(3)盐类沉淀法：通过加入某种沉淀试剂，使生成水不溶性的类沉淀。
(二)根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离
1.分配系数K
K=Cu/CL
K：表示分配系数;Cu：表示溶质在上相溶剂中的浓度;CL：表示溶质在不相溶剂中的浓度。K越大越容易分离。
2.分离因子β
分离因子β可定义为A、B两种溶质在同一溶剂系统中分配系数的比值。
β=KA/KB
β越大越容易分离。
β≧，仅作一次简单萃取就可实现基本分离;若β10，则须萃取10～12次;β≧2时，要想实现分离，须做次以上萃取才能完成;β≈1时，则KA≈KB，意味着两者极其相近，即使作任意次分配也无法实现分离。
3.分配比与pH
对酸性、碱性及两性有机化合物来说，都具有游离型和解离型，二者可互相转化，故在两相中的分配比不同。
一般而言，pH3时，酸性物质多呈非解离状态(ha)、碱性物质呈解离状态(bh+)存在，ph12时，则酸性物质呈解离状态(A-)、碱性物质呈非解离状态(B)存在。
4.纸色谱
纸色谱属于分配色谱，原理与液-液萃取法基本相同。
5.分配柱色谱
分离水溶性或极性较大的成分时，固定相多采用强极性溶剂，如水、缓冲溶液等，流动相一般选择极性相对较小的有机溶剂，称为正相分配色谱;反相分配色谱。
(三)根据物质的吸附性差别进行分离
1.物理吸附基本规律—相似者易于吸附
硅胶、氧化铝是极性吸附剂，遵循“相似者易于吸附”的经验规律。活性炭为是非极性吸附剂，与硅胶、氧化铝相反。
为避免发生化学吸附，酸性物质宜用硅胶，碱性物质则宜用氧化铝进行分离。
2.极性及其强弱判断
化合物的极性由分子中所官能团决定
3.吸附色谱法应用
4.聚酰胺
聚酰胺吸附属于氢键吸附，酰胺基与酚类、黄酮类化合物的酚羟基，或酰胺键上的游离氨基与类、脂肪羧酸上的羰基形成氢键缔合而产生吸附。吸附强弱则取决于各种化合物与之形成氢键缔合的能力。
聚酰胺特别适合分离酚类、醌类、黄酮类化合物。
(1)形成氢键的基团数目越多，吸附能力越强。
(2)成键位置对吸附力也有影响。易形成分于内氢键者，其在聚酰胺上的吸附相对减弱。
(3)分子中芳香化程度高者，则吸附性增强;反之则减弱。
一般情况下，各种溶剂在聚酸胺术上的洗脱能力由弱至强，可大致排列成下列顺序：
水→甲醇→氢氧化钠水溶液→甲酰胺→二甲基甲酰胺→尿素水溶液
5.大孔吸附树脂
(1)吸附原理
大孔吸附树脂是吸附性和分子筛性原理相结合的分子材料。吸附性是由于范德华引力或产生氢键的结果，分子筛性是由于其本身多孔性结构所决定的。
(2)影响吸附的因素
大孔吸附树脂本身的性质、溶剂的性质和化合物的性质是影响吸附的3个重要因素。
(3)大孔吸附树脂的应用
(4)洗脱液的选择
洗脱液可使用甲醇、乙醇、丙醇、乙酸乙酯等。
(四)根据物质分子大小差别进行分离
物质分子大小不同的化合物可用透析法、凝胶过滤法、超滤法、超速离心法等分离
1.凝胶过滤法
凝胶过滤法也叫凝胶渗透色谱、分子筛过滤、排阻色谱，系利用分子筛分离物质的一种方法。
常用的有葡聚糖凝胶(Sepadex-G)以及羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex-LH-20)。SephadexG只适于在水中应用。SephadexLH-20既可在水中应用，又可在由极性与非极性溶剂组成的混合溶剂中应用。
2.膜过滤法
膜过滤法主要包括渗透、反渗透、超滤、电渗析、透析、液膜技术等。透析法多用于水溶性的大分子和小分子物质的分离，如蛋白质、酶、多糖分离过程中的脱盐。按照孔径大小，可将透析膜分为：微滤膜、超滤膜、反渗透膜、纳米膜。
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